动物和真菌来源Ero1的功能、结构得到了较为深入的研究，植物来源Ero1的研究较为局限，利用毕赤酵母重组表达了小麦内质网氧化还原酶1(wEro1);将wero1基因亚克隆至毕赤酵母表达载体pPICZαA，实现了wEro1在毕赤酵母(Pichiapastoris)GS中的分泌表达，优化诱导表达条件后wEro1的产量可达(53．24±2．11)U/mL;能显著提高面粉的粉质特性、面团的流变特性以及面包的焙烤品质。
研究思路
主要结果
1.毕赤酵母诱导表达产物的WesternBlot鉴定
将构建好的重组酵母菌株诱导表达后取上清SDS-PAGE进行WesternBlot鉴定，结果如图2所示，构建的重组酵母菌株相比对照菌株(电转入不含wero1的空载的毕赤酵母菌株)，其泳道上有明显的免疫蛋白条带，说明构建的重组酵母菌株成功表达了重组蛋白。
2．重组wEro1的分离纯化与活性测定
文中采用硫酸铵盐析沉淀与阴离子层析相结合的方式进行蛋白纯化．通过硫酸铵分级沉淀，确定最佳硫酸铵盐析饱和度范围为40%～70%。样品经硫酸铵沉淀、透析后，采用MonoQ阴离子交换子进行梯度洗脱，最终获得电泳纯的wEro1(见图4(a))，可用于酶活性研究．分子质量约为48ku，与理论分子质量一致，条带位置与大肠杆菌重组wEro1相同。
文中构建了pPICZαA-wero1表达载体，并以毕赤酵母为宿主菌进行了表达，经表达条件优化后产量可达(53．24±2．11)U/mL，以硫酸铵沉淀和阴离子交换层析纯化后获得了电泳纯重组wEro1蛋白．活性测定发现:wEro1具有催化二硫键异构酶(PDI)的巯基氧化活性，且最适pH为7．5，最适温度25℃;在中性pH和低温条件下，wEro1具有较好的稳定性．粉质实验发现，相比大肠杆菌重组wEro1，毕赤酵母重组wEro1改善面粉品质的效果更显著．本研究结果为进一步探究wEro1的功能、结构及其在面制品中的应用奠定了基础。
